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技術(shù)文章

丙酮酸脫氫酶(PDH)?操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):1721 更新時(shí)間:2021-08-26

丙酮酸脫氫酶(PDH)操作步驟:

. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔0孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品00μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品0μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.

0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后5分鐘。

內(nèi)皮細(xì)胞活化蛋白受體抗體

效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體抗體

早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白抗體

胞吞調(diào)控蛋白Eps5抗體

真核翻譯起始因子4E抗體

核輸出蛋白5抗體

腸致病性大腸桿菌抗體

E4F轉(zhuǎn)錄因子抗體

睪酮調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和腫瘤抑制基因抗體

聚合酶延伸因子2抗體

聚合酶延伸因子抗體

神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)控抑制蛋白抗體

內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體抗體

紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體

微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體

內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體

雌激素受體β抗體

雌激素受體α抗體

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體

Ephrin A2抗體

大腸埃希菌菌體蛋白抗體

雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶抗體

E Tag標(biāo)簽抗體

登革熱病毒包膜糖蛋白E抗體

食道癌相關(guān)基因抗體


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